高效液相色谱

高效液相色谱（HPLC）也称为高压液相色谱（高压液相色谱），高速液相色谱（高速液相色谱），高分辨率液相色谱（高分辨率液相色谱）。基于经典的液相色谱法，气相色谱理论于20世纪60年代后期引入并迅速发展。它与传统液相色谱之间的区别在于填料颗粒小且均匀，并且小颗粒具有高效率，但是导致高电阻。需要在高压下输送流动相，因此也称为高压液相色谱。由于分析速度快，它也被称为高速液相色谱。高效液相色谱是目前应用最广泛的色谱方法。高效液相色谱系统由流动相储液瓶，输液泵，进样器，柱，检测器和记录仪组成。整个组成类似于气相色谱。然而，已经对作为液体的流动相的特性进行了许多调整。 HPLC输液泵需要恒定稳定的输液量;注射系统需要方便的注射和切换;因为液体流动相粘度比气体高得多，为了降低柱压，HPLC柱通常更厚，长度更小。气相色谱柱。 HPLC应用非常广泛，几乎涵盖了定量和定性分析的每个领域。当使用高效液相色谱时，将液体分析物注入色谱柱并通过固定相中的压力移动。由于被测物质的不同物质与固定相之间的不同相互作用，不同物质从柱中顺序分离并通过检测器不同。最后通过比较这些信号来分析峰值信号，以确定侧面物体中包含的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛应用于化学和生化分析。高效液相色谱与传统的液相色谱没有根本的区别。它的特点是高压输液泵，高灵敏度检测器和高效微粒固定相。适用于高沸点，不挥发，大分子量和不同的分析。极性有机化合物。使用高压输液泵，压力可高达5000 psi（相当于34标准大气压）。均匀的不锈钢柱装有直径约3-10微米的超细载体。常用的载体是用1-2微米二氧化硅涂覆玻璃珠，其与硫酰氯反应形成Si-Cl，进一步连接疏水烷基如Si-C18H37，或阳离子交换基团-si。 （CH2）n-C6H4SO3H，或阴离子交换基团-Si（CH2）nNH2。该载体可承受高压并具有稳定的化学性质。可以使用不同类型载体的HPLC进行吸附色谱，离子交换色谱和凝胶过滤色谱。其分析可以追溯到10-10克的水平。但是，为了制备，可以纯化样品。展览时间很短，通常需要几分钟到10分钟以上。其分析速度和准确度与气相色谱相当。 HPLC适用于分离非挥发性和极性物质。气相色谱仅适用于挥发性物质，两者互补，是目前最理想的色谱方法。 HPLC配备梯度混合器，用于程序控制的洗脱溶剂，数据处理集成器和记录器的电子系统，是一种先进的分析仪器，在生物化学，化学，医学和环境科学研究中发挥着重要作用。影响。在20世纪60年代，由于气相色谱分析高沸点有机物质的局限性，为了分离不易蒸发的蛋白质和核酸等大分子，将气相色谱的理论和方法重新引入经典液体中色谱法。在20世纪60年代后期，Kirkland，Haber，Horvath，Hess，Ripsk等人开发出世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用更细粒度的固定相填充色谱柱，增加色谱柱中的平板数量，在高压下驱动流动相，使经典液相色谱分离需要几天甚至几个月才能完成几个小时。它甚至在几十分钟内完成。 1971年，柯克兰等人。出版了“液相色谱现代实践”一书，标志着高效液相色谱（HPLC）的正式建立。在接下来的时期，高效液相色谱（HPLC）已成为最常用的分离和检测方法。广泛应用于有机化学，生物化学，医药，药物开发与检测，化学工程，食品科学，环境监测，商检和法律检验。应用。高效液相色谱还极大地刺激了固定相材料，检测技术，数据处理技术和色谱理论的发展。在20世纪60年代之前，使用大于100μm的填料颗粒，柱子的效率面临困难，后来研究人员利用颗粒固定相突破瓶颈。 Corkland和Hews成功制备了一种薄壳固定相，在玻璃微球表面具有多孔壳，实现了高速传质，为高效液相色谱的开发奠定了坚实的基础。随着填料的粒度减小，实现了更高的柱效。 20世纪60年代，开发了气动放大泵，注射泵和低流量往复柱塞泵，但后者具有较大的脉冲信号，难以满足高效液相色谱的要求。在20世纪70年代，往复式双泵恒流泵解决了这个问题。 20世纪70年代以后，柯克兰制备了一种全多孔球形硅胶，平均粒径仅为7μm，具有优异的柱效，逐渐取代无定形硅胶。然后生产粘合的固定相以大大提高柱的稳定性，使其可以多次使用。 1970年以后，适合分离生物大分子的填料已成为研究的热点。 1980年以后，提高分离选择性成为色谱工作者的主要问题，人们越来越认识到改变流动相的组成是提高选择性的关键。